前言
眼部結(jié)構(gòu)復(fù)雜，發(fā)育時(shí)來(lái)自三個(gè)胚層：表皮外胚葉形成晶狀體、淚腺、角膜和眼瞼上皮層以及結(jié)膜和其附屬腺體；神經(jīng)外胚葉形成視網(wǎng)膜、瞳孔開(kāi)大肌和括約??；中胚葉形成眼外肌、眼眶和血管。因而眼部雖然小，但發(fā)生的腫瘤多樣。常見(jiàn)的有眼瞼的基底細(xì)胞癌、瞼板腺癌；角結(jié)膜的鱗狀上皮癌、黑素瘤；眶組織的惡性血管內(nèi)皮瘤、淚腺腺癌、橫紋肌肉瘤；神經(jīng)來(lái)源的惡性膠質(zhì)瘤、髓母細(xì)胞瘤。這些腫瘤發(fā)生于眼部，但都和全身其他系統(tǒng)腫瘤存在交集，不為眼科所特有。嬰幼兒眼部最常見(jiàn)的是視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，成人為脈絡(luò)黑素瘤。
視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤(retinoblastoma, RB)是眼科常見(jiàn)兒童惡性腫瘤，屬于神經(jīng)外胚層腫瘤。長(zhǎng)期以來(lái)RB，都是學(xué)者研究的重點(diǎn)。最早發(fā)現(xiàn)的抑癌基因Rh，就是在對(duì)RB家系患者進(jìn)行基因分析時(shí)發(fā)現(xiàn)的。1971年，Knudson又根據(jù)在RB的發(fā)生過(guò)程中要經(jīng)歷Rb基因的兩次突變提出了“二次打擊”理論。20世紀(jì)60年代開(kāi)始，又有報(bào)道建立的多種RB腫瘤的細(xì)胞株，具有代表性的是國(guó)外的Y79、WERI 以及我國(guó)中山眼科中心建立的SO-Rb50。近年又發(fā)現(xiàn)單純Rb1基因的改變不足以誘發(fā)RB，RB患者往往還伴有P53通路基因的改變。這些發(fā)現(xiàn)的每一步都伴有特定RB動(dòng)物模型的應(yīng)用和建立。
部分造模方法
使用動(dòng)物：小鼠
【造模機(jī)制】：
不做任何處理簡(jiǎn)單地將人類(lèi)腫瘤異種移植到其他動(dòng)物身上是不可能成功的。最初學(xué)者是使得實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接受放射線照射、胸腺摘除或者給予抗T細(xì)胞抗體，但由于抑制作用有限，實(shí)驗(yàn)常常失敗。無(wú)胸腺裸鼠一經(jīng)發(fā)現(xiàn)就成為研究胸腺、免疫以及腫瘤的理想動(dòng)物。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)可以生長(zhǎng)于裸鼠的有黑素瘤、惡性膠質(zhì)瘤以及結(jié)腸、胰腺、肺、乳腺、腎、前列腺、宮頸等人類(lèi)腫瘤。對(duì)于大多數(shù)腫瘤，移植成瘤后的自行消退是造模失敗的主要原因。但視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤起源于光感受器前體細(xì)胞，生長(zhǎng)于視網(wǎng)膜內(nèi)，這種解剖位置的特殊性使得視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的裸鼠異位移植存在多種部位。后來(lái)發(fā)現(xiàn)并培育的SClD、OD、NOG小鼠，更為RB研究提供了理想的移植平臺(tái)。
【造模方法】：
1.皮下移植 以SO-RB50細(xì)胞為例。NOD/CID小鼠左側(cè)腹股溝皮下接種SO-RB50細(xì)胞懸液0.2ml，細(xì)胞密度為1×107個(gè)。12~19天開(kāi)始成瘤，成瘤率90％；20天后移植瘤呈現(xiàn)快速生長(zhǎng)。皮下注射成瘤時(shí)間和成瘤率與裸小鼠的品種以及腫瘤細(xì)胞的活性關(guān)系密切。同樣，SO-RB50注射到BALB/c裸鼠頸背部皮下，皮下成瘤率僅1/7，成瘤潛伏期為4周；而將新鮮RB組織接種到BALB/c裸小鼠皮下，成瘤率更低，注射時(shí)需要更高的腫瘤濃度。
2.前房或玻璃體內(nèi)移植 全麻后用復(fù)方托吡卡胺滴眼液散瞳，用微量注射器吸取5µl密度為107個(gè)/ml RB細(xì)胞懸液，自角鞏膜緣部位注射入裸鼠的前房。也可選用新西蘭大白兔。大白兔雖然存在健全的免疫系統(tǒng)，但是眼內(nèi)特殊的結(jié)構(gòu)形成了前房免疫赦免，使得前房注射成瘤成為可能。注射細(xì)胞密度為4×108個(gè)/ml，造模前3d開(kāi)始給予含環(huán)孢菌素A滴眼液，4次／天。前房?jī)?nèi)腫瘤可以存在30天以上，但難以確保持續(xù)存在，對(duì)實(shí)驗(yàn)有諸多限制。
3.視網(wǎng)膜下異位移植 吸取RB細(xì)胞懸液10µl，細(xì)胞密度5.0×106個(gè)/ml。散瞳、麻醉BALB/c裸鼠后顯微鏡下角膜緣內(nèi)穿刺進(jìn)入前房，鈍性微量注射針經(jīng)該穿刺道進(jìn)入前房，穿過(guò)晶狀體懸韌帶（注意勿傷及晶狀體），將晶狀體撥擠到一側(cè)。微量注射針到達(dá)視網(wǎng)膜下后，在微量泵控制器控制下注射0.5µl細(xì)胞懸液于視網(wǎng)膜下。
【模型特點(diǎn)】：
前房或玻璃體注射，注射后3天可見(jiàn)玻璃體腔內(nèi)出現(xiàn)渾濁；注射后6天玻璃體腔內(nèi)可見(jiàn)灰白色腫瘤團(tuán)塊；注射后9天，角膜渾濁，眼內(nèi)結(jié)構(gòu)不可見(jiàn)；注射后12天，眼球突出，眼內(nèi)結(jié)構(gòu)破壞。視網(wǎng)膜下注射，3周后眼玻璃體腔內(nèi)可見(jiàn)游離腫瘤團(tuán)塊；4周后眼球內(nèi)可見(jiàn)實(shí)性腫物突出，眼球結(jié)構(gòu)破壞。裸鼠體重開(kāi)始下降；注射5周后腫瘤突出眶外，裸鼠體重明顯下降。
【模型評(píng)估和應(yīng)用】：
裸鼠皮下接種視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的動(dòng)物模型有成瘤率低、成瘤潛伏期長(zhǎng)的特點(diǎn)；并且不易見(jiàn)到腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。這可能與裸鼠殘存的B淋巴細(xì)胞及NK細(xì)胞對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的抑制作用有關(guān)。同時(shí)腫瘤的生長(zhǎng)環(huán)境與眼內(nèi)環(huán)境差異很大，無(wú)法評(píng)估眼內(nèi)微環(huán)境對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響，也無(wú)法同步顯示腫瘤生長(zhǎng)對(duì)眼球的侵襲、破壞。玻璃體或者前房?jī)?nèi)注射更易成瘤，也可顯示腫瘤生長(zhǎng)對(duì)眼球的破壞以及對(duì)眼球的局部浸潤(rùn)，但其本質(zhì)更接近于RB細(xì)胞的玻璃體腔培養(yǎng)，與RB真實(shí)的發(fā)生發(fā)展還存在一定差異。視網(wǎng)膜下注射無(wú)疑最為接近腫瘤生長(zhǎng)的自然過(guò)程，但操作困難，需要一定的設(shè)備和技術(shù)。
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